Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Kat. nr.: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) er et multipleks kvantitativt PCR-kit baseret på RNA som skabelon.I forbindelse med forsøget blev der udført revers transkription og kvantitativ PCR i samme rør, hvilket forenklede den eksperimentelle operation og reducerede risikoen for kontaminering.I dette kit blev den første streng cDNA effektivt syntetiseret af varmeresistent revers transkriptase og kvantitativt amplificeret af HotStart Tag DNA Polymerase.Sættet indeholder hovedsageligt optimeret MP-buffer, enzymblanding osv. Pufferopløsningen indeholder allerede Mg2+og dNTP.Derudover tilføjes de faktorer, som effektivt kan hæmme den uspecifikke PCR-amplifikation og forbedre amplifikationseffektiviteten af flere qPCR-reaktioner, hvilket kan sikre amplifikationseffektiviteten og udføre op til multiple amplifikationsreaktioner.dUTP/UDG-systemet blev tilføjet for effektivt at forhindre risikoen for aerosolkontamination.
Komponenter
1. Buffer
2. Enzymblanding
Specifikation
| Hot Start | Indbygget hot start |
| Detektionsmetode | Primer-probe detektion |
| PCR metode | Et trin RT-qPCR |
| Polymerase | Taq DNA polymerase |
| Type prøve | DNA |
Opbevaringsbetingelser
Produktet sendes med tøris og kan opbevares ved -25~-15℃ i 1 år.Det bør undgå hyppigefryse-tø.Det anbefales at gemme separat.
Instruktioner
1.Reaktion System
| Komponenter | Volumen (μL) | Endelig koncentration |
| 2 × MP buffer | 12.5 | 1× |
| Enzym blanding | 1 | - |
| Primer/probeblanding (2,5 μM) | 3 | 0,3 μM |
| Skabelon RNA | 1-10 | - |
| RNase fri H2O | til 25 | - |
Bemærkninger:
Sørg for at blande godt før brug, undgå for store bobler forårsaget af voldsomme vibrationer.
en.Primerkoncentration: Primerblanding inklusive multiplex primer, afhængig af situationen kan den optimale primerkoncentration være mellem 0,l og 1,0μM.
b.Probekoncentration: Probeblanding inklusive multiplex probemærkning af forskellen fluorescerende gruppe, afhængigt af situationen kan den optimale probekoncentration være mellem 0,05 og 0,5μM.
c.Skabelonfortynding: qPCR er meget følsom, og det anbefales at fortynde skabelonen.Kontrol-Ct-værdien er egnet mellem 20 og 35.
d.Systemforberedelse: Forbered venligst i det ultrarene arbejdsbord og pipette og reaktionsrør uden nukleaserester;det anbefales at bruge pistolhovedet med filterelement.Undgå krydskontaminering og aerosolkontamination.
2. Optimeret cyklingProtokol
| Cyklus trin | Midlertidig. | Tid | Cykler |
| Omvendt transskription | 50 ℃-en | 20 min | 1 |
| Indledende denaturering | 95℃ | 5 min | 1 |
| Amplifikationsreaktion | 95℃ | 15 sek |
40-45 |
| 60℃ b | 30 sek c |
Bemærkninger:
en.Omvendt transskription: Temperaturen kan vælges mellem 42°C eller 50°C.
b.Amplifikationsreaktion: Temperaturen justeres i henhold til Tm-værdien af de designede primere.
c.Fluorescenssignalopsamling: Indstil venligst den eksperimentelle procedure i overensstemmelse med kravene i instrumentmanualen.
Noter
Bær venligst det nødvendige PPE, såsom laboratoriefrakke og handsker, for at sikre din sundhed og sikkerhed.
