Robustart Taq DNA Polymerase
Robustart Taq DNA Polymerase er en hot-start DNA polymerase.Dette produkt kan ikke kun bedre inhibere den uspecifikke reaktion forårsaget af den ikke-specifikke annealing af primere eller primeraggregering i processen med PCR-systemfremstilling og amplifikation.Derfor har den fremragende specificitet og er mere effektiv til amplifikation af skabeloner med lav koncentration, og den er velegnet til multiplekset PCR-amplifikationsreaktion.Desuden har dette produkt meget god anvendelighed, og stabile amplifikationsresultater kan opnås i forskellige typer PCR-reaktioner.
Komponenter
1.5 U/μL Robustart Taq DNA-polymerase
2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ fri) (valgfrit)
3.25 mM MgCl2(valgfri)
* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ fri) indeholder ikke dNTP og Mg²+, tilføj venligst dNTP'er og MgCl2ved fremstilling af reaktionssystemet.
Anbefalede applikationer
1.Hurtig forstærkning.
2.Multipel forstærkning.
3.Direkte amplifikation af blod, podninger og andre prøver.
4.Påvisning af luftvejssygdomme.
Opbevaringstilstand
-20°C til langtidsopbevaring, bør blandes godt før brug, undgå hyppig frysning-optøning.
*Hvis der forekommer nedbør efter nedkøling, er det normalt;det anbefales at ækvilibrere til stuetemperatur før blanding og brug.
Enhedsdefinition
En aktiv enhed (U) er defineret som mængden af enzym, der inkorporerer 10 nmol deoxyribonukleotid i syre-uopløseligt materiale ved 74°C i 30 minutter under anvendelse af aktiveret laksesperm-DNA som skabelon/primer.
Kvalitetskontrol
1.SDS-PAGE elektroforetisk renhed større end 98%.
2.Amplifikationsfølsomhed, batch-til-batch kontrol, stabilitet.
3.Ingen exogen nukleaseaktivitet, ingen exogen endonuklease eller exonukleasekontamination
Instruktioner
Reaktionsopsætning
| Komponenter | Volumen (μL) | Endelig koncentration |
| 10 × PCR Buffer II (Mg²+ fri)a | 5 | 1× |
| dNTP'er (10 mM hver dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
| Robustart Taq DNA-polymerase (5U/μL) | 0,25-0,5 | 1,25-2,5 U |
| 25 × Primerblandingb | 2 | 1× |
| Skabelon | - | ＜ 1 μg/reaktion |
| ddH2O | Til 50 | - |
Bemærkninger:
1) a.Bufferen indeholder ikke dNTP og Mg²+, tilsæt venligst dNTP'er og MgCl2ved fremstilling af reaktionssystemet.
2) b.Hvis det bruges til qPCR/qRT-PCR, skal fluorescerende prober føjes til reaktionssystemet.Normalt vil en endelig primerkoncentration på 0,2 μM give gode resultater;hvis reaktionsevnen er dårlig, kan primerkoncentrationen justeres i området 0,2-1 μM.Probekoncentrationen er normalt optimeret i området 0,1-0,3 μM.Koncentrationsgradientforsøg kan udføres for at finde den bedste kombination af primer og probe.
Termisk cyklingsprotokol
| Almindelig PCRbehandle | |||
| Trin | Temperatur | Tid | Cykler |
| Præ-denaturering | 95℃ | 1-5 min | 1 |
| Denaturering | 95℃ | 10-20 sek | 40-50 |
| Udglødning / forlængelse | 56-64℃ | 20-60 sek | |
| Hurtig PCRbehandle | |||
| Trin | Temperatur | Tid | Cykler |
| Præ-denaturering | 95℃ | 30 sek | 1 |
| Denaturering | 95℃ | 1-5 sek | 40-45 |
| Udglødning / forlængelse | 56-64℃ | 5-20 sek | |
Noter
1.Amplifikationshastigheden for hurtig DNA-polymerase bør ikke være mindre end 1 kb/10 s.Temperaturstignings- og faldhastigheden, temperaturstyringstilstanden og varmeledningseffektiviteten for forskellige PCR-instrumenter varierer meget, så det anbefales at optimere de optimale reaktionsbetingelser for det specifikke hurtige PCR-instrument.
2.Systemet er meget tilpasningsdygtigt, med højere specificitet og følsomhed.
3.Velegnet til brug som højsensitive PCR-detektionsreagenser og kan bruges i multiplekse PCR-amplifikationsreaktioner.
4.5'→3' polymeraseaktivitet, 5'→3' exonukleaseaktivitet;ingen 3'→5' exonukleaseaktivitet;ingen korrekturfunktion.
5.Velegnet til kvalitativ og kvantitativ test af PCR og RT-PCR.
6.3'-enden af PCR-produktet er A, som kan klones direkte ind i en T-vektor.
7.Tretrinsmetoden anbefales til primere med lave annealingstemperaturer eller til amplifikation af fragmenter længere end 200 bp.
