Multiplex qPCR Probe Premix
Kat. nr.: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (farvebaseret) er en præ-opløsning til 2 x real-time kvantitativ PCR-amplifikation karakteriseret ved høj sensitivitet og specificitet, som er blå i farven og har virkningen af prøvetilsætning.Dette produkt er et 2× Mix forblandet reagens, der muliggør op til fire fluorescerende kvantitative PCR-reaktioner i en enkelt reaktionsbrønd.Dette produkt indeholder den genetisk modificerede antistofmetode til at hotstarte Taq-enzym, hvilket i høj grad forbedrer amplifikationsfølsomheden og specificiteten.Samtidig har dette produkt dybt optimeret multi-reaktionsbufferen, hvilket kan forbedre amplifikationseffektiviteten af reaktionen og fremme den effektive amplifikation af lavkoncentrationsskabeloner.Dette produkt kan bruges til genotypebestemmelse og multipleks kvantitativ analyse.
Specifikation
| Hot Start | Indbygget hot start |
| Detektionsmetode | Primer-probe detektion |
| PCR metode | qPCR |
| Polymerase | Taq DNA polymerase |
| Type prøve | DNA |
Opbevaringsbetingelser
Produktet sendes med tøris og kan opbevares ved -25~-15℃ i 2 år.
Instruktioner
1. ReaktionSystem
| Komponenter | Volumen (μL) | Endelig koncentration |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Primerblanding (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Probeblanding (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox referencefarve | 0,5 | 1× |
| Skabelon DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | op til 25 | - |
Bemærkninger:Bland grundigt før brug for at undgå for store bobler fra kraftig rystning.
en.Primerkoncentration: Primer Mix indeholder flere par primere, normalt hver primer med en slutkoncentration på 0,2 μmol/L og kan også justeres mellem 0,1 og 0,5 μmol/L efter behov.
b.Probekoncentration: Probe Mix indeholder flere prober med forskellige fluorescenssignaler, og koncentrationen af hver probe kan justeres mellem 50 og 250 nmol/L i henhold til den specifikke situation.
1.Rox farvestof reference: Det bruges på Real Time PCR amplifikationsinstrumenter såsom Applied Biosystems til at korrigere fejlen i fluorescenssignal genereret mellem brønde;dette produkt indeholder ikke Rox farvestof reference.Cas#10200 anbefales, hvis det er nødvendigt.
2.Skabelonfortynding: qPCR er meget følsom, og det anbefales at fortynde skabelonen til brug.Hvis skabelonen er en cDNA-stamopløsning, bør skabelonvolumenet ikke overstige 1/10 af det samlede volumen.
3.Reaktionssystem: 25μL, 30μL eller 50 μL anbefales for at sikre effektiviteten og repeterbarheden af målgenamplifikation.
4.Systemforberedelse: Forbered venligst i den super rene bænk, og brug spidserne og reaktionsrørene uden nukleaserester;det anbefales at bruge spidserne med filterpatroner.Undgå krydskontaminering og aerosolkontamination.
2.Reaktionsprogram
| Cyklus trin | Midlertidig. | Tid | Cykler |
| Indledende denaturering | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Denaturering | 95 ℃ | 15 sek | 45 |
| Udglødning/forlængelse | 60 ℃ | 30 sek |
Bemærkninger:
1.Udglødning/forlængelse: Temperaturen og tiden kan justeres passende i henhold til den beregnede primer Tm-værdi.
2.Fluorescenssignalopsamling: Den fluorescenssignalopsamlingstid, der kræves for forskellige qPCR-detektionsinstrumenter, er forskellig. Indstil venligst i henhold til minimumstidsgrænsen.Tiden for flere almindelige instrumenter er indstillet som følger:
20 sek.: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sek.: Applied Biosystems 7300
32 sek.: Applied Biosystems 7500
Noter
Bær venligst det nødvendige PPE, såsom laboratoriefrakke og handsker, for at sikre din sundhed og sikkerhed!
