Wild Taq DNA-polymerase
Taq DNA-polymerase er en termostabil DNA-polymerase fra Thermus aquaticus YT-1, som har en 5′→3′ polymeraseaktivitet og en 5′ flap endonukleaseaktivitet.
Komponenter
| Komponent | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq-buffer | 2×1 ml | 2×10 ml | 2×50 ml | 5×200 ml |
| Taq DNA-polymerase (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5×10 ml |
Opbevaringstilstand
Transport under 0°C og opbevares ved -25°C~-15°C.
Enhedsdefinition
En enhed er defineret som mængden af enzym, der inkorporerer 15 nmol dNTP i syreuopløseligt materiale på 30 minutter ved 75°C.
Kvalitetskontrol
1.Protein Purity Assay (SDS-PAGE):Renheden af Taq DNA-polymerase var ≥95 % bestemt ved SDS-PAGE-analyse.
2.Endonuclease aktivitet:Et minimum på 5 U Taq DNA-polymerase med 1 μg λDNA i 16 timer ved 37 ℃ resulterer i ingen påviselig nedbrydning som bestemt.
3.Exonuklease aktivitet:Et minimum på 5 U Taq DNA-polymerase med 1 μg λ -Hind Ⅲ fordøjet DNA i 16 timer ved 37 ℃ resulterer i ingen påviselig nedbrydning som bestemt.
4.Nickase aktivitet:Et minimum på 5 U Taq DNA-polymerase med 1 μg pBR322 DNA i 16 timer ved 37°C resulterer i ingen påviselig nedbrydning som bestemt.
5.RNase aktivitet:Et minimum på 5 U Taq DNA-polymerase med 1,6 μg MS2 RNA i 16 timer ved 37 °C resulterer i ingen påviselig nedbrydning som bestemt.
6.E coliDNA:5 U Taq DNA-polymerase screenes for tilstedeværelsen af E. coli genomisk DNA ved hjælp af TaqMan qPCR med primere, der er specifikke for E. coli 16S rRNA locus.E. coli genomiske DNA-kontamination er ≤1 kopi.
7.PCR-amplifikation (5,0 kb lambda-DNA)- En 50 µL reaktion indeholdende 5 ng Lambda-DNA med 5 enheder Taq DNA-polymerase i 25 cyklusser af PCR-amplifikation resulterer i det forventede 5,0 kb-produkt.
Reaktionsopsætning
| Komponenter | Bind |
| Skabelon DNAa | valgfri |
| 10 μM Forward Primer | 1 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μL |
| dNTP Mix (10 mM hver) | 1 μL |
| 10×Taq buffer | 5 μL |
| Taq DNA polymeraseb | 0,25 μL |
| Nukleasefrit vand | Op til 50 μL |
Bemærkninger:
1) Den optimale reaktionskoncentration af forskellige skabeloner er forskellig.Følgende tabel viser den anbefalede skabelonbrug af 50 µL reaktionssystem.
| DNA | Beløb |
| Genomisk | 1 ng-1 μg |
| Plasmid eller viral | 1 pg-1 ng |
2) Den optimale koncentration af Taq DNA-polymerase kan variere fra 0,25 µL~1 µL i specialiserede applikationer.
ReaktionProgram
| Trin | Temperatur(°C) | Tid | Cykler |
| Indledende denatureringa | 95 ℃ | 5 min | - |
| Denaturering | 95 ℃ | 15-30 sek | 30-35 cyklusser |
| Udglødningb | 60 ℃ | 15 sek | |
| Udvidelse | 72 ℃ | 1 kb/min | |
| Endelig udvidelse | 72 ℃ | 5 min | - |
Bemærkninger:
1) Den indledende denatureringsbetingelse er egnet til de fleste amplifikationsreaktioner og kan modificeres i henhold til kompleksiteten af skabelonstrukturen.Hvis skabelonstrukturen er kompleks, kan præ-denatureringstiden forlænges til 5-10 minutter for at forbedre den indledende denatureringseffekt.
2) Udglødningstemperaturen skal justeres i henhold til Tm-værdien af primeren, som generelt er indstillet til 3~5 ℃ lavere end Tm-værdien af primeren;For komplekse skabeloner er det nødvendigt at justere annealingstemperaturen og forlænge forlængelsestiden for at opnå effektiv forstærkning.
