Rnase A
Ribonuklease A (RNaseA) er et enkeltstrenget polypeptid indeholdende 4 disulfidbindinger med en molekylvægt på ca. 13,7 kDa.RNase A er en endoribonuklease, der specifikt nedbryder enkeltstrenget RNA ved C- og U-rester.Specifikt genkender spaltningen phosphodiesterbindingen dannet af 5'-ribosen af et nukleotid og phosphatgruppen på 3'-ribosen af det tilstødende pyrimidinnukleotid, således at de 2,3'-cykliske fosfater hydrolyseres til den tilsvarende 3 ′nukleosidphosphater (f.eks. spaltes pG-pG-pC-pA-pG af RNase A for at generere pG-pG-pCp og A-PG).RNase A er den mest aktive til spaltning af enkeltstrenget RNA.Den anbefalede arbejdskoncentration er 1-100μG/mL, kompatibel med forskellige reaktionssystemer.Lav saltkoncentration (0-100 mM NaCl) kan bruges til at skære enkeltstrenget RNA, dobbeltstrenget RNA og RNA-kæder dannet ved RNA-DNA-hybridisering.Ved høj saltkoncentration (≥0,3 M) spalter RNase A imidlertid kun specifikt enkeltstrenget RNA.
RNase A bruges mest til at fjerne RNA under fremstillingen af plasmid-DNA eller genomisk DNA. Hvorvidt DNase er aktiv under fremstillingsprocessen eller ej, kan nemt påvirke reaktionen.Den traditionelle metode til kogning i et vandbad kan bruges til at inaktivere DNase-aktivitet.Dette produkt indeholder ikke DNase og protease og kræver ikke varmebehandling før brug.Derudover kan dette produkt også bruges i molekylærbiologiske eksperimenter såsom RNase-beskyttelsesanalyse og RNA-sekvensanalyse.
Opbevaringsbetingelser
Produktet kan opbevares ved -25～-15℃, gyldigt i 2 år.
Instruktioner
Dette er en af de almindelige metoder til fremstilling af RNase A-opbevaringsløsning.Den kan også tilberedes afandre metoder i henhold til de traditionelle metoder i laboratoriet eller referencelitteraturen (f.eksdirekte opløsning i 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 eller Tris-NaCl-opløsning)
1. Brug 10 mM natriumacetat (pH 5,2) til at fremstille 10 mg/ml RNase A opbevaringsopløsning
2. Opvarmning ved 100 ℃ i 15 min
3. Afkøl til stuetemperatur, tilsæt 1/10 volumen af 1 M Tris-HCl (pH 7,4), juster dens pH til 7,4 (forfor eksempel, tilsæt 500 ml 10 g/ml RNase-opbevaringsopløsning 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Underpakket ved -20 ℃ til frossen opbevaring, som kan være stabil i op til 2 år.
[Noter]: Ved kogning af RNaseA-opløsning under neutrale forhold vil der dannes RNase-udfældning;Kog det ved en lavere pH, og hvis der er nedbør, kan det observeres, hvilket kan være forårsaget af tilstedeværelsen af proteinurenheder.Hvis der findes sediment efter kogning, kan urenheder fjernes ved højhastighedscentrifugering (13000 rpm) og derefter underpakkes til fryselagring.
Produkt information
| Synonymer | Ribonuclease I;Bugspytkirtel ribonuklease;Ribonuklease 3'-pyrimidnooligonukleotidohydrolase;rnase A;Endoribonulcease I |
| CAS-nr. | 9001-99-4 |
| Udseende | Hvidt frysetørret pulver |
| Molekylær vægt | ~ 13,7 kDa (aminosyresekvens) |
| Ph-værdi | 7,6 (aktivitetsområde 6-10) |
| Egnet temperatur | 60 ℃ (Aktivitetsområde 15-70 ℃) |
| Aktiverende agent | Na2+.K+ |
| Inhibitor | RNAse-hæmmer |
| Inaktiveringsmetode | Kan ikke inaktiveres ved opvarmning, det foreslås at bruge centrifugesøjle |
| Oprindelse | Kvæg |
| Opløselighed | Opløseligt i vand (10mg/ml) |
| Tab på tør | ≤5,0 % |
| Enzym aktivitet | ≥60 Kunitz-enheder/mg |
| Isoelektrisk punkt | 9.6 |
Noter
For din sikkerhed og sundhed skal du bære laboratoriefrakker og engangshandsker til betjening.
