One Step RT-qPCR SYBR Grøn Premix
Kat. nr.: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix er til fluorescens kvantificering baseret på SYBR Green I farvestof.Ved hjælp af genspecifikke primere fuldføres revers transkription og qPCR-reaktioner i ét rør, hvilket eliminerer behovet for gentagne hætteåbninger og pipettering, hvilket i høj grad forbedrer assayeffektiviteten og reducerer risikoen for kontaminering.Til RNA-prøver anvender kittet varmeresistent revers transkriptase til effektiv cDNA-syntese og HotStart Taq DNA-polymerase til kvantitativ amplifikation.Under det optimerede buffersystem kan sættets følsomhed være så høj som 0,1 pg for højt udtrykte mål og så høj som 1 pg for moderat udtrykte mål.Sættet er velegnet til amplifikation og kvantificering af DNA-prøver.Det muliggør følsom påvisning og kvantificering af nukleinsyrer fra forskellige plante- og dyreprøver, celler og mikroorganismer.
Komponenter
| No | Navn | Bind | Bind |
| 1 | Avanceret buffer | 250 μL | 2×1,25 ml |
| 2 | Avanceret enzymblanding | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNase fri H2O | 250 μL | 2×1,25 ml |
Opbevaringsbetingelser
Dette produkt skal opbevares ved -25~-15℃ væk fra lys i 1 år.
Instruktioner
1. Reaktionssystemkonfigurationd
| Komponenter | Volumen (μL) | Volumen (μL) | Slutkoncentration |
| Avanceret buffer | 12.5 | 25 | 1× |
| Avanceret enzymblanding | 1 | 2 | - |
| Forward Primer (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Reverse Primer (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| RNA Tamplateb | X | X | - |
| RNase fri H2Oc | til 25 | til 50 | - |
Bemærkninger:
1) a.TDen endelige primerkoncentration var 0,2 μmol/L, som også kunne justeres mellem 0,1 og 1 μmol/L efter behov.
2) b.Reagenset er ekstremt følsomt med totalt RNA i området 1pg-1μg, og test af humane prøver viste et optimalt input på 1 pg-100 ng, der kontrollerer for en samlet Ct-værdi i området 15-30 efter behov.
3) c.Det anbefales at bruge 20μL eller 50μL for at sikre validiteten og reproducerbarheden af målgenamplifikation.
4) d.Forbered venligst i den ultra-rene bænk og brug nukleaserester-frie spidser og reaktionsrør;spidser med filterpatroner anbefales.Undgå krydskontaminering og aerosolkontamination.
2.Reaktionsprogram
| Cyklus trin | Midlertidig. | Tid | Cykler |
| Omvendt transskription | 50 ℃a | 6 min | 1 |
| Indledende denaturering | 95℃ | 5 min | 1 |
| Amplifikationsreaktion | 95℃ | 15 sek | 40 |
| 60℃b | 30 sek | ||
| Smeltekurvestadie | Instrumentstandarder | 1 | |
Bemærkninger:
1) a.Den omvendte transkriptionstemperatur kan vælges mellem 50-55°C i henhold til de eksperimentelle behov.For DNA-prøver kan revers transkriptionsprocessen udelades.
2) b.I særlige tilfælde kan annealing/extension temperaturen justeres i henhold til primerens Tm-værdi, 60°C anbefales.
Noter
1. Dette produkt er kun til forskningsbrug.
2. Brug venligst laboratoriefrakker og engangshandsker for din sikkerhed.
