RNAse-hæmmer (glycerolfri)
Murin RNase-inhibitor er en rekombinant murin RNase-inhibitor udtrykt og oprenset fra E.coli.Det binder til RNase A, B eller C i et forhold på 1:1 gennem ikke-kovalent binding og hæmmer derved aktiviteten af de tre enzymer og beskytter RNA mod nedbrydning.Det er dog ikke effektivt mod RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H eller RNase fra Aspergillus.Murin RNase-hæmmer blev testet med RT-PCR, RT-qPCR og IVT mRNA og var kompatibel med forskellige kommercielle reverse transkriptaser, DNA-polymeraser og RNA-polymeraser.
Sammenlignet med humane RNase-hæmmere indeholder murin RNase-hæmmer ikke to cysteiner, der er meget følsomme over for oxidation, som forårsager inaktivering af inhibitoren.Det gør det stabilt ved lave koncentrationer af DTT (mindre end 1 mM).Denne funktion gør den velegnet til brug i reaktioner, hvor høje koncentrationer af DTT er negativ for reaktionen (f.eks. Real-time RT-PCR).
Aanvendelse
Dette produkt kan bruges i vid udstrækning i ethvert eksperiment, hvor RNase-interferens er mulig for at undgå RNA-nedbrydning, såsom:
1. Førstestrengs cDNA-syntese, RT-PCR, RT-qPCR, etc.;
2. Beskyt RNA mod nedbrydning i in vitro transkription/translation (f.eks. viral replikation in vitro);
3. Inhibering af RNase-aktivitet under RNA-isolering og oprensning.
Opbevaringsbetingelser
Opbevares ved -25～-15℃;
Fryse-tø-cyklusser ≤ 5 gange;
Gyldig i 1 år.
Enhedsdefinition
En enhed er defineret som mængden af RNase-hæmmer, der kræves for at hæmme aktiviteten af 5 ng RNase A med 50 %.
Molekylær vægt
RNase-hæmmer (Glycerol-fri) er et 50 kDa protein.
Kvalitetskontrol
Exonuklease Aktivitet:
Inkubation af 40 U enzym med 1 μg λ-Hind III-fordøjelses-DNA i 16 timer ved 37°C resulterede i ingen påviselig nedbrydning af DNA'et som bestemt ved gelelektroforese.
Endonuklease aktivitet:
Inkubation af 40 U enzym med 1 μg λ DNA i 16 timer ved 37°C resulterede i ingen påviselig nedbrydning af DNA'et som bestemt ved gelelektroforese.
Nicking Aktivitet:
Inkubation af 40 U enzym med 1 μg pBR322 i 16 timer ved 37 ℃ resulterede i ingen påviselig nedbrydning af DNA'et som bestemt ved gelelektroforese.
RNase Aktivitet:
Inkubation af 40 U enzym med 1,6 μg MS2 RNA i 4 timer ved 37 ℃ resulterede i ingen påviselig nedbrydning af RNA'et som bestemt ved gelelektroforese.
E.coli DNA:
40 U enzym detekteres af TaqMan qPCR.E.coli-DNA'et er ≤ 0,1 pg/40U.
Nnotes
1. Ryst eller rør ikke voldsomt for at forhindre enzyminaktivering.
2.RNase-hæmmer er aktiv ved temperaturer fra 25℃ til 55℃ og er inaktiveret ved ≥65℃.
3. Aktiviteten af RNase H, RNase 1 og RNase T1 hæmmes ikke.
4. pH-området for inhibering af RNase-aktivitet er bredt (aktivt ved pH 5-9), og udviser maksimal aktivitet ved pH 7-8.
