Temperaturfølsom UNG
Temperaturfølsom UNG (TS-UNG) er en opnået ved rekombinant ekspression i E. coli.Enzymet katalyserer frigivelsen af frit uracil fra uracil-holdigt enkelt- og dobbeltstrenget DNA og er inaktivt over for RNA.Sammenlignet med det konventionelle UNG-enzym af E. coli-genoprindelse har TS-UNG-enzym højere aktivitet ved lave temperaturer (20℃~37℃) og er temperaturfølsomt og let inaktiveret (50℃), hvilket undgår nedbrydning af dUTP-holdig amplifikation produkter ved stuetemperatur ved den resterende aktivitet, der kan forblive efter inaktivering af det konventionelle UNG-enzym.Derfor er TS-UNG-enzym ikke kun egnet til PCR-kontaminationsforebyggende reaktion, men matcher også godt med RT-PCR-amplifikationsprogrammet og kan bruges i RT-PCR-kontaminationsforebyggende reaktion.
Anbefalet anvendelse
Kontamineringsforebyggende amplifikation
Opbevaringstilstand
-20°C til langtidsopbevaring, bør blandes godt før brug, undgå hyppig frysning-optøning.
Opbevaringsbuffer
20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCI, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, stabilisator, 50% glycerol.
Enhedsdefinition
Mængden af enzym, der kræves for at nedbryde 1 µg enkeltstrenget DNA indeholdende dU-baser på 1 time ved 37°C, er 1 aktivitetsenhed (U).
Kvalitetskontrol
1.SDS-PAGE elektroforetisk renhed større end 98 %
2.Nedbrydningsaktivitet, batch-til-batch kontrol, stabilitet
3.Ingen exogen nukleaseaktivitet, ingen exogen endonuklease eller exonukleasekontamination.
Instruktioner
| Komponenter | Volumen (μL) | Slutkoncentration |
| 10 × PCR-buffer (dNTP-fri, Mg²+gratis) | 5 | 1× |
| dUTP'er (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (erstat dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1,25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5 U) |
| 25 × Primer Mix-en | 2 | 1× |
| Skabelon | - | ＜1μg/reaktion |
| ddH2O | Til 50 | - |
Bemærk: a: Hvis den bruges til qPCR/qRT-PCR, skal den fluorescerende probe tilføjes reaktionssystemet.Normalt kan en endelig primerkoncentration på 0,2 μM give gode resultater;når reaktionsydelsen er dårlig, kan primerkoncentrationen justeres i området 0,2-1 μM.Normalt er probekoncentrationen optimeret i området 0,1-0,3 μM.Koncentrationsgradientforsøg kan udføres for at finde den bedste kombination af primer og probe.
Noter
1.Den optimale reaktionstemperatur for TS-UNG enzym er relativt lav, og den kan optimeres i området 20 ℃ ~ 37 ℃, doseringen af enzym og reaktionstiden kan optimeres i intervallet 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 min;og enzymet kan inaktiveres i processen med revers transkription.
2.Den er velegnet til PCR og RT-PCR for at forhindre kontaminering.
3.Undgå hyppig frysning-optøning, og udsæt ikke for store temperaturudsving.
4.Forskellige gener, der skal amplificeres, har forskellig udnyttelseseffektivitet af dUTP og følsomhed over for UNG-enzym, derfor, hvis brugen af UNG-system fører til et fald i detektionsfølsomheden, bør reaktionssystemet justeres og optimeres, hvis du har brug for teknisk support, kontakt venligst vores firma.
