2×HiF Taq plus Master Mix
Kat. nr.: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (With Dye) er en klar-til-brug 2×forblandet opløsning indeholdende Plus HIF DNA-polymerase, dNTP'er og optimeret buffer.To monoklonale antistoffer ved stuetemperatur, der hæmmer polymeraseaktivitet og 3′→5′exonukleaseaktivitet, tilsættes masterblandingen til let og meget specifik Hot Start PCR.Ekstensionsfaktoren tilsættes masterblandingen for at give enzymet en lang fragmentamplifikationskapacitet, længden af amplifikationen kan være op til 13 kb, enzymet har en 5′→3′ DNA-polymeraseaktivitet og en 3′→5′ exonukleaseaktivitet, dens troskab er 83 gange større end Taq DNA-polymerase, hvilket er 9 gange så stor som almindelig DNA-polymerase.Det er velegnet til amplifikation af komplekse skabeloner, amplifikationsproduktet er en stump ende.
2×HIF Taq plus Master Mix(With Dye) har fordelene ved hurtig og nem, høj sensitivitet, stærk specificitet, god stabilitet osv., reaktionssystemet behøver kun at tilføje primere og skabeloner og kan amplificeres med en to- trinprotokol, der forenkler de eksperimentelle trin og sparer tid.Dette produkt indeholder elektroforeseindikatorfarvestoffer, og PCR-produkter kan bruges direkte til elektroforese.Derudover indeholder produktet også et specifikt beskyttelsesmiddel, så masterblandingen kan opretholde en stabil aktivitet efter gentagen frysning-optøning.
Opbevaringsbetingelser
Produkter skal opbevares ved -25~-15 ℃ i 1 år.
specifikationer
Produkt specifikation | Master Mix |
Koncentration | 2× |
Hot Start | Indbygget Hot Start |
Overhæng | Sløv |
Reaktionshastighed | Hurtig |
Størrelse (slutprodukt) | Op til 13kb |
Betingelser for transport | Tøris |
Produkttype | High fidelity PCR forblandinger |
Instruktioner
1.PCR-reaktionssystem
Komponenter | Volumen (μL) |
DNA skabelon | Egnet |
Fremadgående primer (10 μmol/L) | 2.5 |
Reverse Primer (10 μmol/L) | 2.5 |
2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
ddH2O | til 50 |
2.Anbefalet brug af forskellige skabeloner
Type skabelon | Amplificere fragmenter fra 1 kb til 10 kb |
Genomisk DNA | 50 ng-200 ng |
Plasmid eller viralt DNA | 10pg-20ng |
cDNA | 1-2,5 µL (Må ikke overstige 10 % af det endelige PCR-reaktionsvolumen) |
3.Amplifikationsprotokol
1) Totrinsprotokol (kompleksitetsskabelon)
Cyklus trin | Midlertidig. | Tid | Cykler |
Indledende denaturering | 98℃ | 3 min | 1 |
Denaturering | 98℃ | 10 sek | 30-35 |
Udvidelse | 68℃ | 30 sek/kb | |
Endelig forlængelse | 72℃ | 5 min | 1 |
2) Tre-trins protokol (almindelig protokol)
Cyklus trin | Midlertidig. | Tid | Cykler |
Indledende denaturering | 98℃ | 3 min | 1 |
Denaturering | 98℃ | 10 sek | 30-35 |
Udglødning | 60℃ | 20 sek | |
Udvidelse | 72℃ | 30 sek/kb | |
Endelig forlængelse | 72℃ | 5 min | 1 |
3) Annealing Gradient Protocol (kompleksitetsskabelon)
Cyklus trin | Temperatur | Tid | Cykler |
Indledende denaturering | 98℃ | 3 min | 1 |
Denaturering | 98℃ | 10 sek | 15 (1℃ reduktion pr. cyklus) |
Gradientudglødning | 70-55 ℃ | 20 sek | |
Udvidelse | 72℃ | 30 sek/kb | |
Denaturering | 98℃ | 10 sek |
20 |
Udglødning | 55℃ | 20 sek | |
Udvidelse | 72℃ | 30 sek/kb | |
Endelig forlængelse | 72℃ | 5 min | 1 |
Funktioner under forskellige amplifikationsprotokol
Protokol | To-trins | Tre-trins | Gradientudglødning |
Spec. | hurtig | medium | langsom |
Specificitet | høj | medium | høj |
PCR-udbytte | medium | høj | medium |
Detektionshastighed | høj | medium | høj |
Noter
Bær venligst det nødvendige PPE, såsom laboratoriefrakke og handsker, for at sikre din sundhed og sikkerhed!