UDG/UNG enzymer
UDG(uracil-DNA-glycosylase) kan katalysere hydrolysen af den N-glykosidiske forbindelse mellem uracilbasen og sukker-phosphat-rygraden i ssDNA og dsDNA.Det kan nemt kontrollere aerosolforurening og er velegnet til almindelige molekylærbiologiske systemer som PCR, qPCR, RT-qPCR og LAMP.
specifikationer
| Udtryksvært | Rekombinant E. coli med uracil DNA glycosylase gen |
| Molekylær vægt | 24. 8kDa |
| Renhed | ≥95 % (SDS-SIDE) |
| Varme inaktivering | 95℃, 5~10 min |
| Enhedsdefinition | En enhed (U) er defineret som mængden af enzym, der kræves for at katalysere hydrolysen af 1 μg dU-holdigt dsDNA på 30 minutter ved 25 ℃. |
Opbevaring
Produktet skal opbevares ved -25℃~-15°C i to år.
Instruktioner
1.Fremstilling af PCR-reaktionsblandingen ifølge følgende system
| Komponenter | Volumen (μL) | Slutkoncentration |
| 10×PCR-buffer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/udvaskning) | 1 | 0,2 mmol/udvaskning |
| Skabelon DNA | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq DNA-polymerase (5 U/μL) | 0. 5 | 0,05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH2O | Op til 50 | - |
Bemærk: I henhold til de eksperimentelle krav kan den endelige koncentration af dUTP justeres mellem 0,2-0,6 mmol/L, og 0,2 mmol/L dTTP kan tilsættes selektivt.
2.Amplifikationsprocedure
| Cyklus trin | Temperatur | Tid | Cykler |
| dU-holdig skabelonnedbrydning | 25℃ | 10 min | 1 |
| UDG aktivering, skabelon initial denaturering | 95℃ | 5 ~ 10 min | 1 |
| Denaturering | 95℃ | 10 sek |
30-35 |
| Udglødning | 60℃ | 20 sek | |
| Udvidelse | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Endelig forlængelse | 72℃ | 5 min | 1 |
Bemærk: Reaktionstiden ved 25°C kan justeres inden for 5-10 minutter i henhold til de eksperimentelle krav.
Noter
1.UDG er aktiv i de fleste PCR-reaktionsbuffere.
2.Enzymer bør opbevares i en fryseboks eller på et isbad, når de bruges, og skal opbevares ved -20°C umiddelbart efter brug.
3.Bær venligst det nødvendige PPE, såsom laboratoriefrakke og handsker, for at sikre din sundhed og sikkerhed!
