Universal SYBR GREEN qPCR Premix (blå)

Kat. nr.: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) er en præ-opløsning til 2×real-time kvantitativ PCR-amplifikation karakteriseret ved høj sensitivitet og specificitet, er blå i farven og har effekten af ​​prøvetilsætningssporing.Kernekomponenten Taq DNA-polymerase bruger antistof-hotstart til effektivt at inhibere ikke-specifik amplifikation på grund af primer-annealing under prøveforberedelse.Samtidig tilføjer formlen de fremmende faktorer for at forbedre amplifikationseffektiviteten af ​​PCR-reaktion og udligne amplifikationen af ​​gener med forskellige GC-indhold (30 ~ 70%), således at kvantitativ PCR kan opnå et godt lineært forhold i en bred kvantitativ område.Dette produkt indeholder speciel ROX Passive Reference Dye, som er anvendelig til de fleste qPCR-instrumenter.Det er ikke nødvendigt at justere koncentrationen af ​​ROX på forskellige instrumenter.Det er kun nødvendigt at tilføje primere og skabeloner for at forberede reaktionssystemet til amplifikation.

Komponenter

Universal Blue qPCR Master Mix

Opbevaringsforhold

Produktet sendes med isposer og kan opbevares ved -25℃~-15℃ i 18 måneder.Det er nødvendigt at undgå stærk lysbestråling ved opbevaring eller klargøring af reaktionssystemet.

Specifikation

Instruktioner

1.Reaktionssystem

[Bemærk]: Bland grundigt før brug for at undgå for store bobler fra kraftig rystning.

a) Primerkoncentration: Den endelige primerkoncentration er 0,2μmol/L og kan også justeres mellem 0,1 og 1,0μmol/L efter behov.

b) Skabelonkoncentration: Hvis skabelonen er ufortyndet cDNA-stamopløsning, bør det anvendte volumen ikke overstige 1/10 af det totale volumen af ​​qPCR-reaktionen.

c) Skabelonfortynding: Det anbefales at fortynde cDNA-stamopløsningen 5-10 gange.Den optimale mængde tilsat skabelon er bedre, når Ct-værdien opnået ved amplifikation er 20-30 cyklusser.

d) Reaktionssystem: Det anbefales at bruge 20μL eller 50μL for at sikre effektiviteten og repeterbarheden af ​​målgenamplifikation.

e) Systemforberedelse: Forbered venligst i den superrene bænk og brug spidserne og reaktionsrørene uden nukleaserester;det anbefales at bruge spidserne med filterpatroner.Undgå krydskontaminering og aerosolkontamination.

2.Reaktionsprogram

Standard program

Hurtigt program

[Bemærk]: Det hurtige program er velegnet til langt de fleste gener, og standardprogrammer kan prøves for individuelle komplekse sekundære strukturgener.

a) Udglødningstemperatur og tid: Juster venligst i henhold til længden af ​​primer og målgen.

b) Fluorescenssignalopsamling (★): Indstil venligst den eksperimentelle procedure i overensstemmelse med kravene i brugsanvisningen til instrumentet.

c) Smeltekurve: Instrumentets standardprogram kan bruges normalt.

3. Resultatanalyse 

Et minimum af tre biologiske replikater var påkrævet til kvantitative eksperimenter.Efter reaktionen skal amplifikationskurven og smeltekurven bekræftes.

3.1 Amplifikationskurve:

Standard amplifikationskurven er S-formet.Kvantitativ analyse er mest nøjagtig, når Ct-værdien falder mellem 20 og 30. Hvis Ct-værdien er mindre end 10, er det nødvendigt at fortynde skabelonen og udføre testen igen.Når Ct-værdien er mellem 30-35, er det nødvendigt at øge skabelonkoncentrationen eller volumenet af reaktionssystemet for at forbedre amplifikationseffektiviteten og sikre nøjagtigheden af ​​resultatanalysen.Når Ct-værdien er større end 35, kan testresultaterne ikke kvantitativt analysere genets ekspression, men kan bruges til kvalitativ analyse.

3.2 Smeltekurve:

Den enkelte top af smeltekurven indikerer, at reaktionsspecificiteten er god, og kvantitativ analyse kan udføres;hvis smeltekurven viser dobbelte eller flere toppe, kan kvantitativ analyse ikke udføres.Smeltekurven viser dobbelte toppe, og det er nødvendigt at bedømme, om ikke-måltoppen er primer-dimer eller ikke-specifik amplifikation ved DNA-agarosegelelektroforese.Hvis det er en primerdimer, anbefales det at reducere primerkoncentrationen eller redesigne primere med høj amplifikationseffektivitet.Hvis det er ikke-specifik amplifikation, skal du øge annealingstemperaturen eller redesigne primerne med specificitet.

Noter

Bær venligst det nødvendige PPE, såsom laboratoriefrakke og handsker, for at sikre dit helbred og sikkerhed!

Dette produkt er KUN til forskningsbrug!