DNase I (Rnase-fri) (5u/ul)
Kat. nr.: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) er en endodeoxyribonuclease, der kan fordøje enkelt- eller dobbeltstrenget DNA.Det genkender og spalter phosphodiesterbindinger for at producere monodeoxynukleotider eller enkelt- eller dobbeltstrengede oligodeoxynukleotider med fosfatgrupper ved 5'-terminalen og hydroxyl ved 3'-terminalen.Aktiviteten af DNase I afhænger af Ca2+og kan aktiveres af divalente metalioner, såsom Mn2+og Zn2+.5 mM Ca2+beskytter enzymet mod hydrolyse.I nærværelse af Mg2+, kunne enzymet tilfældigt genkende og spalte et hvilket som helst sted på enhver DNA-streng.I nærværelse af Mn2+, kan dobbeltstrengene af DNA samtidigt genkendes og spaltes på næsten det samme sted til dannelse af flade ende-DNA-fragmenter eller klæbrige ende-DNA-fragmenter med 1-2 nukleotider frem.
Komponenter
| Navn | 0,1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, RNase-fri | 20 μL | 200 μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I-buffer | 1 ml | 1 ml | 5 x 1 ml | 5 x 10 ml |
Opbevaringsforhold
-25 ℃ ~ -15 ℃ til opbevaring;Transport under isposer.
Instruktioner
1. Forbered reaktionsopløsningen i det RNase-fri rør i henhold til proportionerne nedenfor:
| Komponent | Bind |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase I-buffer | 1 μL |
| DNase I, RNase-fri (5U/μL) | 1 U pr. µg RNA① |
| ddH2O | Op til 10μL |
Bemærk: ①Beregn mængden af DNase I, der skal tilføjes baseret på mængden af RNA.
2. 37 ℃ i 15 minutter;
3. Tilsæt 0,5 M EDTA til den endelige koncentration på 2,5 mM~5 mM, og opvarm ved 65 ℃ i 10 minutter for at stoppe reaktionen.Prøven kan bruges direkte til den næste reaktion, såsom revers transkriptioneksperiment.
Enhedsdefinition
En enhed er defineret som mængden af enzym, der fuldstændigt vil nedbryde 1 µg pBR322DNA på 10 minutter ved 37℃.
Kvalitetskontrol
RNase:5U DNase I med 1,6 µg MS2 RNA i 4 timer ved 37 ℃ giver ingen nedbrydning, dabestemt ved agarosegelelektroforese.
Noter
1. Forbered venligst 0.5MEDTA selv.
2. Brug 1U DNase I pr. µg RNA.Men hvis RNA er mindre end 1 µg, skal du bruge 1U DNase I.
3. Anbring venligst enzymet på is under drift.
