Viralt DNA/RNA-ekstraktionssæt
Dette kit er velegnet til hurtig ekstraktion af viralt DNA/RNA med høj renhed fra prøver såsom nasopharyngeale podninger, miljøpodninger, cellekultursupernatanter og vævshomogenat-supernatanter.Sættet er baseret på silicamembranoprensningsteknologi, der eliminerer behovet for at bruge phenol/chloroform organiske opløsningsmidler eller tidskrævende alkoholudfældning til at ekstrahere viralt DNA/RNA af høj kvalitet.De opnåede nukleinsyrer er fri for urenheder og klar til brug i nedstrøms eksperimenter såsom revers transkription, PCR, RT-PCR, real-time PCR, næste generations sekventering (NGS) og Northern blot.
Opbevaringsforhold
Opbevares ved 15 ~ 25 ℃ og transporteres ved stuetemperatur
Komponenter
| Komponenter | 100RXNS |
| Buffer VL | 50 ml |
| Buffer RW | 120 ml |
| RNase-fri ddH2 O | 6 ml |
| FastPure RNA kolonner | 100 |
| Opsamlingsrør (2 ml) | 100 |
| RNase-fri indsamlingsrør (1,5 ml) | 100 |
Buffer VL:Giv et miljø til lysis og binding.
Buffer RW:Fjern resterende proteiner og andre urenheder.
RNase-fri ddH2O:Eluer DNA/RNA fra membranen i spinsøjlen.
FastPure RNA kolonner:Adsorberer specifikt DNA/RNA.
Opsamlingsrør 2 ml:Opsaml filtrat.
RNase-fri opsamlingsrør 1,5 ml:Saml DNA/RNA.
Ansøgninger
Nasopharyngeale podninger, miljøpodninger, cellekultursupernatanter og vævshomogenate supernatanter.
Selvforberedt Materials
RNase-fri pipettespidser, 1,5 ml RNase-fri centrifugerør, centrifuge, vortexmixer og pipetter.
Eksperiment proces
Udfør alle de følgende trin i et biosikkerhedsskab.
1. Tilsæt 200 μl af prøven til et RNase-frit centrifugerør (fyld op med PBS eller 0,9 % NaCl i tilfælde af utilstrækkelig prøve), tilsæt 500 μl Buffer VL, bland godt ved at vortexe i 15 – 30 sek., og centrifuger kort for at samle blandingen i bunden af røret.
2. Placer FastPure RNA-søjler i et opsamlingsrør på 2 ml.Overfør blandingen fra trin 1 til FastPure RNA-søjler, centrifuger ved 12.000 rpm (13.400 × g) i 1 min, og kassér filtratet.
3. Tilføj 600 μl buffer RW til FastPure RNA-kolonner, centrifuger ved 12.000 rpm (13.400 × g) i 30 sekunder, og kassér filtratet.
4. Gentag trin 3.
5. Centrifuger den tomme kolonne ved 12.000 rpm (13.400 x g) i 2 min.
6. Overfør forsigtigt FastPure RNA-søjler til et nyt RNase-frit opsamlingsrør 1,5 ml (medfølger i sættet), og tilsæt 30 – 50 μl RNase-frit ddH2O til midten af membranen uden at røre søjlen.Lad stå ved stuetemperatur i 1 min. og centrifuger ved 12.000 rpm (13.400 × g) i 1 min.
7. Kassér FastPure RNA-kolonner.DNA/RNA'et kan anvendes direkte til efterfølgende analyser eller opbevares ved -30~ -15°C i en kort periode eller -85 ~-65°C i en længere periode.
Noter
Kun til forskningsbrug.Ikke til brug i diagnostiske procedurer.
1. Udlign prøver til stuetemperatur på forhånd.
2. Vira er meget smitsom.Sørg for, at alle nødvendige sikkerhedsforanstaltninger er taget før eksperimentet.
3. Undgå gentagen frysning og optøning af prøven, da dette kan føre til nedbrydning eller reduceret udbytte af det ekstraherede virale DNA/RNA.
4. Selvforberedt udstyr inkluderer RNase-fri pipettespidser, 1,5 ml RNase-fri centrifugerør, centrifuge, vortex-mixer og pipetter.
5. Når du bruger sættet, skal du bære en laboratoriefrakke, engangslatexhandsker og en engangsmaske og bruge RNase-fri forbrugsstoffer for at minimere risikoen for RNase-kontamination.
6. Udfør alle trin ved stuetemperatur, medmindre andet er angivet.
Mekanisme og arbejdsgang
