BspQI
BspQI kan udtrykkes rekombinant i E. coli, der kan genkende specifikke steder og produceres under
BspQI, en IIs-restriktionsendonuklease-restriktionsendonuklease, er afledt af en rekombinant E. coli-stamme, der bærer det klonede og modificerede BspQI-gen fra Bacillus sphaericus.Det kan genkende specifikke steder, og genkendelsessekvens og spaltningssteder er som følger:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
produktegenskaber
1. Høj aktivitet, hurtig fordøjelse;
2. Lav stjerneaktivitet, der sikrer nøjagtig skæring som "skalpel";
3. Uden BSA og fri for animalsk oprindelse;
Methyleringsfølsomhed
Dam methylering:Ikke følsom;
Dcm methylering:Ikke følsom;
CpG-methylering:Ikke følsom;
Opbevaringsforhold
Produktet skal sendes ≤ 0 ℃;Opbevares ved -25~- 15℃ tilstand.
Opbevaringsbuffer
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCI, 1,0 mM dithiothreitol, 500 µg/ml rekombinant albumin, 0, 1 % Trition X-100 og 50 % glycerol (pH 7,0 ved 25°C).
Enhedsdefinition
En enhed er defineret som den mængde enzym, der kræves til at fordøje 1 µg intern kontrol-DNA på 1 time ved 50°C i et totalt reaktionsvolumen på 50 µL.
Kvalitetskontrol
Protein Purity Assay (SDS-PAGE):Renheden af BspQI var ≥95 % bestemt ved SDS-PAGE-analyse.
RNase:10 U BspQI med 1,6 μg MS2 RNA i 4 timer ved 50 ℃ giver ingen nedbrydning som bestemt ved agarosegelelektroforese.
Ikke-specifik DNase-aktivitet:10U BspQI med 1μg λ DNA ved 50 ℃ i 16 timer sammenlignet med 50 ℃ i 1 time, giver intet overskydende DNA som bestemt ved agarosegelelektroforese.
Ligering og recuting:Efter fordøjelse af 1 μg λDNA med 10U BspQI kan DNA-fragmenter ligeres med T4 DNA-ligase ved 16ºC.Og disse ligerede fragmenter kan omskæres med BspQI.
E coli DNA: E. coli 16s rDNA-specifik TaqMan qPCR-detektion viste, at E.coli-genomrest ≤ 0,1 pg/ul.
Værtsproteinrest:≤ 50 ppm
Bakteriel Endotoksin: LAL-test, ifølge Chinese Pharmacopoeia IV 2020-udgave, gelgrænsetestmetode, generel regel (1143).Bakterielt endotoksinindhold bør være ≤10 EU/mg.
Reaktionssystem og betingelser
| Komponent | Bind |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I-buffer | 5 μL |
| dd H2O | Op til 50 μL |
Reaktionsbetingelser: 50 ℃, 1-16 timer.
Varmeinaktivering: 80°C i 20 min.
Det anbefalede reaktionssystem og betingelser kan give en relativt god enzymfordøjelseseffekt, som kun er til reference. Se venligst de eksperimentelle resultater for detaljer.
Produktanvendelse
Restriktion endonukleasefordøjelse, hurtig kloning.
Noter
1. Volumenet af enzym ≤ 1/10 af reaktionsvolumenet.
2. Stjerneaktivitet kan forekomme, når glycerolkoncentrationen er mere end 5 %.
3. Spaltningsaktivitet kan forekomme, når substratet er under det anbefalede forhold.
