Varmstart Bst 2.0 DNA-polymerase (glycerolfri)
Bst DNA-polymerase V2 er afledt af Bacillus stearothermophilus DNA-polymerase I, som har 5'→3' DNA-polymeraseaktivitet og stærk kædeerstatningsaktivitet, men ingen 5'→3'-exonukleaseaktivitet.Bst DNA Polymerase V2 er ideelt egnet til strengforskydning, isotermisk amplifikation LAMP (Loop-medieret isotermisk amplifikation) og hurtig sekventering.Bst DNA polymerase V2 er en hot-start version baseret på Bst DNA polymerase V2 (HC5005A) opnået ved reversibel modifikationsteknologi, som kan hæmme DNA polymerase aktivitet ved stuetemperatur, så reaktionssystemet kan betjenes og formuleres ved stuetemperatur for at forhindre ikke -specifik amplifikation og forbedre reaktionseffektiviteten, og denne version kan lyofiliseres.Derudover frigives dens aktivitet ved høje temperaturer, så der er ikke behov for et separat aktiveringstrin.
Komponenter
| Komponent | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA polymerase V2 (glycerolfri) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 buffer | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100 mm) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Ansøgninger
1.LAMP isotermisk amplifikation
2.DNA-streng enkelt forskydningsreaktion
3.Høj GC-gensekventering
4.DNA-sekventering af nanogramniveau.
Opbevaringstilstand
Transport under 0°C og opbevares ved -25°C~-15°C.
Enhedsdefinition
En enhed er defineret som mængden af enzym, der inkorporerer 25 nmol dNTP i syreuopløseligt materiale på 30 minutter ved 65°C.
Kvalitetskontrol
1.Protein Purity Assay (SDS-PAGE):Renheden af Bst DNA-polymerase V2 er ≥99 % bestemt ved SDS-PAGE-analyse under anvendelse af Coomassie Blue-detektion.
2.EndonukleaseAktivitet:Inkubation af en 50 μL reaktion indeholdende minimum 8 U Bst DNA polymerase V2 med 1 μg λDNA i 16 timer ved 37 ℃ resulterer i ingen påviselig nedbrydning som bestemt.
3.Exonuklease aktivitet:Inkubation af en 50 μL reaktion indeholdende minimum 8 U Bst DNA polymerase V2 med 1 μg λ -Hind Ⅲ fordøjet DNA i 16 timer ved 37 ℃ resulterer i ingen påviselig nedbrydning som bestemt.
4.Nickase aktivitet:Inkubation af en 50 μL reaktion indeholdende minimum 8 U Bst DNA polymerase V2 med 1 μg pBR322 DNA i 16 timer ved 37°C resulterer i ingen påviselig nedbrydning som bestemt.
5.RNase aktivitet:Inkubation af en 50 μL reaktion indeholdende minimum 8 U Bst DNA polymerase V2 med 1,6 μg MS2 RNA i 16 timer ved 37°C resulterer i ingen påviselig nedbrydning som bestemt.
6.E coliDNA:120 U Bst DNA-polymerase V2 screenes for tilstedeværelsen af E. coli genomisk DNA ved anvendelse af TaqMan qPCR med primere, der er specifikke for E. coli 16S rRNA-locuset.E. coli genomiske DNA-kontamination er ≤1 kopi.
LAMPEREaktion
| Komponenter | 25μL |
| 10×HC Bst V2 buffer | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mm) | 1,5 μL |
| dNTP'er (10 mM hver) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Grøn (25×)a | 1,0 μL |
| Primer blandingb | 6 μL |
| Bst DNA-polymerase V2 (glycerolfri) (8 U/uL) | 1 μL |
| Skabelon | × μL |
| ddH2O | Op til 25 μL |
Bemærkninger:
1) a.SYTOTM 16 Grøn (25×): I henhold til eksperimentelle behov kan andre farvestoffer anvendes som erstatninger;
2) b.Primerblanding: opnået ved at blande 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB og andre volumener.
Reaktion og Tilstand
1 × HC Bst V2-buffer, inkubationstemperaturen er mellem 60°C og 65°C.
Varme inaktivering
80°C, 20 min
