Ultra Nuclease
UltraNuclease er en genetisk manipuleret endonuklaese afledt af Serratia marcescens, som er i stand til at nedbryde DNA eller RNA, enten dobbelt- eller enkeltstrenget, lineær eller cirkulær under en bred vifte af tilstande, fuldstændigt nedbryde nukleinsyrer til 5'-monophosphat oligonukleotider med 3-5 baselængder .Efter genteknologisk modifikation blev produktet fermenteret, udtrykt og oprenset i Escherichia coli (E. coli), hvilket reducerer viskositeten af cellesupernatant og cellelysat videnskabelig forskning, men også forbedrer oprensningseffektiviteten og funktionel forskning af protein.Det kan også bruges i genterapi, virusoprensning, vaccineproduktion, protein- og polysaccharid-farmaceutisk industri som en værtsrest-nukleinsyrefjernelsesreagens.
Produktegenskaber
CAS-nr. | 9025-65-4 |
EF-nr. | |
Molekylær vægt | 30 kDa |
Isoelektrisk punkt | 6,85 |
Protein renhed | ≥99%(SDS-PAGE & SEC-HPLC) |
Specifik aktivitet | ≥1.1×106U/mg |
Optimal temperatur | 37°C |
Optimal pH | 8,0 |
ProteaseAktivitet | negativ |
Biobyrde | <10CFU/100.000U |
Resterende værtscelleprotein | ≤10 ppm |
Tung metal | ≤10 ppm |
Bakteriel endotoksin | <0,25EU/1000U |
Opbevaringsbuffer | 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl2 , 20 mM NaCl, 50% Glycerol |
Opbevaringsforhold
≤0°C transport;-25~-15°C Opbevaring, 2 års gyldighed (undgå frysning-optøning).
Enhedsdefinition
Mængden af enzym, der blev brugt til at ændre absorptionsværdien af △A260 med 1,0 inden for 30 minutter ved 37 °C, pH 8,0, svarende til fordøjet 37μg laksesperm-DNA ved at skære i oligonukleotider, blev defineret som en aktiv enhed (U).
Kvalitetskontrol
Resterende værtscelleprotein: ELISA kit
•Protease Rester: 250KU/mL UltraNuclease reagerede med substrat i 60 minutter, ingen aktivitet blev påvist.
•Bakteriel endotoksin: LAL-Test, Pharmacopoeia of the People's Republic of China Volume 4 (2020 Edition) gelgrænsetestmetode.Generelle regler (1143).
•Biobelastning: Pharmacopoeia of the People's Republic of China bind 4 (2020-udgaven) – Generelt
Regler for sterilitetstest (1101), PRC National Standard, GB 4789.2-2016.
•Tung metal:ICP-AES, HJ776-2015.
Operation
UltraNuclease-aktivitet blev signifikant hæmmet, når SDS-koncentrationen var over 0,1 % eller EDTA
koncentrationen var over 1 mM. Overfladeaktivt middel Triton X-100, Tween 20 og Tween 80 havde ingen effekt på nuklease
egenskaber, når koncentrationen var under 1,5 %.
Operation | Optimal drift | Gyldig operation |
Temperatur | 37℃ | 0-45 ℃ |
pH | 8,0-9,2 | 6,0-11,0 |
Mg2+ | 1-2 mM | 1-15 mM |
DTT | 0-100 mM | >100mM |
2-Mercaptoethanol | 0-100 mM | >100mM |
Monovalent metalion (Na+, K+ osv.) | 0-20 mM | 0-200 mM |
PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
Anvendelse og dosering
• Fjern eksogen nukleinsyre fra vaccineprodukter, reducer risikoen for resterende nukleinsyretoksicitet og forbedre produktsikkerheden.
• Reducer viskositeten af fodervæske forårsaget af nukleinsyre, forkort bearbejdningstiden og øg proteinudbyttet.
• Fjern nukleinsyren, som indhyllede partikler (virus, inklusionslegeme osv.), hvilket er befordrende
til frigivelse og oprensning af partiklen.
Eksperimentel type | Proteinproduktion | Virus, vaccine | Cellestoffer |
Celler nummer | 1g celle våd vægt (resuspenderet med 10 ml buffer) | 1L gæring flydende supernatant | 1L kultur |
Minimum dosis | 250U | 100U | 100U |
Anbefalet dosering | 2500U | 25000U | 5000U |
• Nukleasebehandling kan forbedre opløsningen og genvindingen af prøven til søjlekromatografi, elektroforese og blotting-analyse.
• Ved genterapi fjernes nukleinsyre for at opnå oprensede adeno-associerede vira.