Prøvefrigivelsesreagens
Prøvefrigivelsesreagens er til molekylære POCT-diagnostiske scenarier.For de to systemer med direkte amplifikation LAMP og direkte amplifikation PCR er der ikke behov for nukleinsyreekstraktion.Det rå lysat af prøven kan amplificeres direkte, målgenet kan detekteres nøjagtigt, prøvedetektionstiden kan forkortes yderligere, hvilket perfekt matcher anvendelseskravene for molekylær POCT.Den er velegnet til næsepodninger, halspodninger og andre prøvetyper.De behandlede prøver kan bruges direkte til real-time fluorescens kvantitativ PCR eller LAMP detektion, og de samme resultater som konventionelle ekstraktionsmetoder kan opnås uden komplicerede nukleinsyreekstraktionsoperationer.
Opbevaringsbetingelser
Transporter og opbevares ved stuetemperatur.
Kvalitetskontrol
Funktionel detektion – kvantitativ qPCR: 800μl prøvefrigivelsesreagenssystemet blev amplificeret
med 1000 kopier Novel Pseudovirus, en næsepodningsprøve, resulterende lignende amplifikationskurver ogΔCt-værdier inden for ± 0,5 Ct.
Eksperimentel procedureres
1. Tag 800 μl prøvefrigivelsesreagens og spred lyseringsopløsningen i 1,5 mL prøvetagningsrør
2. Tag næsepodningen eller svælgpodningen med podepinden; Prøveudtagningsprocedure for næsepodningen: Tag den sterile podepind og læg den i næseborene, fremad langsomt til ca. 1,5 cm dyb, drej forsigtigt 4 gange mod næseslimhinden i mere end 15 sekunder , gentag derefter den samme operation på den anden næsehule med den samme podning. Procedure for prøveudtagning af halspodning: Tag den sterile podepind og tør forsigtigt hurtigt svælgmandlerne og den bagerste svælgvæg 3 gange.
3.Placer podepinden straks i prøvetagningsglasset.Podepinden skal drejes og blandes i opbevaringsopløsningen i mindst 30 sekunder for at sikre, at prøven elueres fuldstændigt i prøvetagningsrøret.
4. Inkubation ved stuetemperatur (20~ 25 ℃) i 1 minut, forberedelsen af lyseringsbuffer er fuldført.
5. Både 25 μl system RT-PCR og RT-LAMP var kompatible med 10 μl mængde skabelontilsætning til detektionsforsøg.
Noter
1. Minimumsmængden af prøve direkte lysat svarende til en enkelt podning kan justeres til 400μl, som kan justeres i henhold til testbehovene.
2. Når prøven er behandlet af prøvefrigivelsesreagenset, anbefales det at udføre den næste fase af testen så hurtigt som muligt, intervallets ventetid er fortrinsvis mindre end 1 time.
3. Prøvelysatets pH er sur, og detektionssystemet skal have en vis buffer.Det er velegnet til de fleste PCR-, RT-PCR- og LAMP-fluorescensdetektion med pH-buffer, men ikke egnet til LAMP-kolorimetrisk detektion uden buffer.
