RT-LAMPE Colormetrisk Master Mix HCB5204A
Dette produkt indeholder reaktionsbuffer, RT-Enzymes Mix (Bst DNA polymerase og varmeresistent revers transkriptase), frysetørrede Protectants og kromogene farvestofkomponenter.For at bruge skal du blot bruge Buffer, reaktionsenzymet og primeren blandes og tilsættes skabelonen;tilføjelse af frysetørret beskyttelsesmiddel kan være lige.Den blev forbundet til en frysetørrer og lyofiliseret, og kun primerne og skabelonerne blev tilføjet, når de blev brugt.Dette sæt giver en hurtig, klar visuel påvisning af amplifikation, hvilken negative reaktion er angivet med rødt, og positiv reaktion er angivet ved en ændring til gul.
Komponent
| Komponent | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Loop-medieret amplifikationsbuffer (med farvestof) | 0,96 ml | 4,80 mL×2 | 9,60 ml x 10 |
| RT-enzymer blanding | 270 μL | 2,70 ml | 2,70 ml x 10 |
| Lyofiliseret beskyttelsesmiddel | 0,96 ml × 2 | 9,60 mL×2 | 9,60 ml x 20 |
Ansøgninger
Til DNA eller RNA isotermisk amplifikation.
Opbevaringsbetingelser
Transporteret med tøris, opbevaret ved -25~ -15℃.Undgå hyppig frys-optøning, produktet er gyldigt i 12 måneder.
Protokol
1.Optø reaktionsbufferen, der skal bruges, ved stuetemperatur.Vortex kortvarigt eller vend rørene flere gange for at blande dem grundigt, og centrifuger derefter for at opsamle væsken til bunden af røret.
2.Forberedelse af reaktionssystem.Dette reagens kan fremstilles i to reaktionssystemer, flydende reaktionsblanding og lyofiliseret systemblanding.
1) Forbered flydende reaktionsblanding
| Komponent | Bind |
| Loop-medieret amplifikationsbuffer (med farvestof) | 10 μL |
| RT-enzymer blanding | 2,8 μL |
| 10 × Primer Mixa | 5 μL |
| Skabeloner DNA/RNA b | × μL |
| Nukleasefrit vand | Op til 50 μL |
2) Lyofiliseringssystemblanding
① Forbered lyofiliseret blanding
| Komponent | Bind |
| Loop-medieret amplifikationsbuffer (med farvestof) | 10 μL |
| Lyofiliseret beskyttelsesmiddel | 20 μL |
| RT-enzymer blanding | 2,8 μL |
| Nukleasefrit vand | Op til 50 μL |
② Lyofilisering: Den forberedte blanding blev frysetørret i et 50μL system
③ Forbered reaktionsblandingen
| Komponent | Bind |
| Lyofiliseret blanding | 1 styk |
| 10 × Primer Mixa | 5 μL |
| Skabeloner DNA/RNA b | × μL |
| Nukleasefrit vand | Op til 50 μL |
Bemærkninger:
1) a.10×Primer Mix: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (vandopløselig) anbefales til nukleinsyretempl.
1.Inkuber ved 65°C i 30-45 minutter, som kan forlænges passende i henhold til farveændring Reaktionstid.
2.Ifølge det blotte øje var gul positiv og rød negativ.
Noter
1.Salt kan forekomme i bunden af bufferrøret, vortex kortvarigt eller vend rørene flere gange for at blandes grundigt ved stuetemperatur.
2.Reaktionstemperaturen kan optimeres mellem 62 ℃ og 68 ℃ i henhold til tilstanden af primere.
3.De pakkede reagenser bør ikke udsættes for luft i længere tid.
4.Den røde og gule misfarvningsreaktion afhænger af pH-ændringen i reaktionssystemet. Brug venligst ikke den indeholdende Tris-nukleinsyreopbevaringsopløsning, anbefales at bruge ddH2O lagret nukleinsyre;
5.Forsøget bør standardiseres, herunder forberedelse af reaktionssystemet, lyofilisering og prøvebehandling og prøvetilsætningsproces;
6.For at undgå kontaminering anbefales det at forberede reaktionssystemet i en ultra-ren bænk, i andre Tilføj skabeloner til stinkskabet i rummet for at undgå falsk positiv interferens.
