Rnase A
Ribonuklease A(RNaseA) er et enkeltstrenget polypeptid indeholdende 4 disulfidbindinger med en molekylvægt på ca. 13,7 kDa.RNase A er en endoribonuklease, der specifikt nedbryder enkeltstrenget RNA ved C- og U-rester.Specifikt genkender spaltningen phosphodiesterbindingen dannet af 5'-ribosen af et nukleotid og phosphatgruppen på 3'-ribosen af det tilstødende pyrimidinnukleotid, således at de 2,3'-cykliske fosfater hydrolyseres til de tilsvarende 3 'nukleosidphosphater (f.eks. spaltes pG-pG-pC-pA-pG af RNase A for at generere pG-pG-pCp og A-PG).RNase A er den mest aktive til spaltning af enkeltstrenget RNA.Den anbefalede arbejdskoncentration er 1-100 μ G/mL, kompatibel med forskellige reaktionssystemer.Lav saltkoncentration (0-100 mM NaCl) kan bruges til at skære enkeltstrenget RNA, dobbeltstrenget RNA og RNA-kæder dannet ved RNA-DNA-hybridisering.
Ved høj saltkoncentration (≥0,3 M) spalter RNase A imidlertid kun specifikt enkeltstrenget RNA.
RNase A bruges mest til at fjerne RNA under fremstillingen af plasmid-DNA eller genomisk DNA.Hvorvidt DNase er aktiv under fremstillingsprocessen eller ej, kan nemt påvirke reaktionen.Den traditionelle metode til kogning i et vandbad kan bruges til at inaktivere DNase-aktivitet.Dette produkt indeholder ikke DNase og protease og kræver ikke varmebehandling før brug.Derudover kan dette produkt også bruges i molekylærbiologiske eksperimenter såsom RNase-beskyttelsesanalyse og RNA-sekvensanalyse.
Opbevaringsforhold
Produktet skal opbevares ved -25℃~- 15℃ i 2 år.
specifikationer
| Udseende | Pulver |
| Antal | 100mg / 1g |
| Produkttype | RNase A |
Instruktioner
Dette er en af de almindelige metoder til fremstilling af RNase A-opbevaringsløsning.Det kan også tilberedesved andre metoder i henhold til de traditionelle metoder i laboratoriet eller referencelitteraturen (som f.eksdirekte opløsning i 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 eller Tris-NaCl-opløsning)
1. Brug 10 mM natriumacetat (pH 5,2) til at fremstille 10 mg/ml RNase A opbevaringsopløsning.
2. Opvarmning ved 100 ℃ i 15 min.
3. Afkøl til stuetemperatur, tilsæt 1/10 volumen af 1 M Tris-HCl (pH 7,4), juster dens pH til 7,4 (fortilsæt for eksempel 500 ml 10 mg/ml RNase-opbevaringsopløsning 1 M Tris-HCl, pH 7,4).
4. Underpakket ved -20 ℃ til frossen opbevaring, som kan være stabil i op til 2 år.
[Noter]:
Ved kogning af RNaseA-opløsning under neutrale betingelser vil der dannes RNase-udfældning;Kog det ved en lavere pH, og hvis der er nedbør, kan det observeres, hvilket kan være forårsaget af tilstedeværelsen af proteinurenheder.Hvis der findes sediment efter kogning, kan urenheder fjernes ved højhastighedscentrifugering (13000 rpm) og derefter underpakkes til fryselagring.
Noter
Bær venligst det nødvendige PPE, såsom laboratoriefrakke og handsker, for at sikre din sundhed og sikkerhed.
