One Step Fast RT-qPCR Probe Premix-UNG
Kat. nr.: HCR5143A
One Step RT-qPCR Probe Kit (FOR FAST) er et probe-baseret RT-qPCR hurtig detektionskit, der er velegnet til single-plex eller multiplex kvantitativ PCR ved hjælp af RNA som skabelon (såsom RNA-virus).Dette produkt bruger en ny generation af antistof-modificeret Taq DNA-polymerase og et-trins dedikeret revers transkriptase, med en optimeret buffer til hurtig amplifikation, som har hurtigere amplifikationshastighed, højere amplifikationseffektivitet og specificitet.Det understøtter afbalanceret amplifikation i både single-plex og multiplex af prøver med lav og høj koncentration på kort tid.
Komponenter
1. 5×RT-qPCR buffer (U+)
2. Enzymblanding (U+)
Bemærkninger:
en.5×RT-qPCR buffer (U+) inkluderer dNTP og Mg2+;
b.Enzymblanding (U+) inkluderer revers transkriptase, Hot Start Taq DNA-polymerase, RNase-hæmmer og UDG;
c.Brug RNase-fri spidser, EP-rør osv.
Før brug blandes 5×RT-qPCR-bufferen (U+) grundigt.Hvis der er udfældning efter optøning, skal du vente på, at bufferen vender tilbage til stuetemperatur, blandes og opløses og derefter bruge dem normalt.
Opbevaringsbetingelser
Produktet sendes med tøris og kan opbevares ved -25~-15℃ i 1 år.
Instruktioner
1. Reaktion System
| Komponenter | Volumen (20 μL reaktion) |
| 2 × RT-qPCR buffer | 4μL |
| Enzymblanding (U+) | 0,8 μL |
| Primer frem | 0,1~ 1,0μM |
| Primer omvendt | 0,1~ 1,0μM |
| TaqMan-sonde | 0,05~0,25μM |
| Skabelon | X μL |
| RNase-frit vand | op til 25μL |
Bemærkninger: Reaktionsvolumen er 10-50μL.
2. Cykelprotokol (Standard)
| Cyklus trin | Midlertidig. | Tid | Cykler |
| Omvendt transskription | 55 ℃ | 10 min | 1 |
| Indledende denaturering | 95 ℃ | 30 sek | 1 |
| Denaturering | 95 ℃ | 10 sek | 45 |
| Udglødning/forlængelse | 60 ℃ | 30 sek |
| Cykelprotokol (Hurtig) Cyklus trin |
Midlertidig. |
Tid |
Cykler |
| Omvendt transskription | 55 ℃ | 5 min | 1 |
| Indledende denaturering | 95 ℃ | 5 sek | 1 |
| Denaturering | 95 ℃ | 3 sek | 43 |
| Udglødning/forlængelse | 60 ℃ | 10 sek |
Bemærkninger:
en.Omvendt transkriptionstemperatur er mellem 50 ℃ til 60 ℃, at øge temperaturen hjælper med at forstærke komplekse strukturer og skabeloner med højt CG-indhold;
b.Den optimale annealingstemperatur skal justeres baseret på Tm-værdien af primeren, og vælg den korteste tid til fluorescenssignalopsamling baseret på Real Time PCR-instrumentet.
Noter
Bær venligst det nødvendige PPE, såsom laboratoriefrakke og handsker, for at sikre din sundhed og sikkerhed!
