Multiplex One Step RT-qPCR Premix
Beskrivelse
Kat. nr.: HCR5141A
Multiplex One Step RT-qPCR Premix er et multipleks kvantitativt PCR-kit baseret på RNA som skabelon.I forsøget udføres revers transkription og kvantitativ PCR i samme reaktionsrør, hvilket forenkler den eksperimentelle operation og mindsker risikoen for kontaminering.Det unikke design af buffer og enzymblanding kan bruges i et-trins frysetørret system.Sættet anvender varmeresistent revers transkriptase til effektiv syntese af første streng cDNA ved hjælp af hotstart Taq DNA polymerase til kvantitativ amplifikation.Den indeholder optimeret reaktionsbuffer, enzymblanding osv., og faktorer, der effektivt hæmmer ikke-specifik PCR-amplifikation og forbedrer amplifikationseffektiviteten af flere qPCR-reaktioner, blev tilføjet, hvilket muliggør multipel fluorescens kvantitativ amplifikation og samtidig sikre amplifikationseffektiviteten af primere.
Komponenter
| Navn |
| 1. Lyo-buffer |
| 2. Lyo-enzymblanding |
| 3. Lyo beskyttelsesmiddel |
Transportforholdion
A: Lyo-buffer og beskyttelsesmiddel: -25~-15 ℃, holdbarhed er 1 år.
B: Lyo-enzymblanding, 2-8 ℃, holdbarhed er 6 måneder.
Instruktion til betjening
1. Reaktionssystem (tag 25μL som eksempel)
| Komponenter | Volumen (μL) | Endelig koncentration |
| Lyo-buffer | 6 | 1* |
| Lyo-enzymblanding | 1 | - |
| Lyo-Protectant | 8 | - |
| Primerblanding (10μM) | 1 | 0,1-1 uM |
| Probemix (10μM) | 0,5 | 0,05-0,5 uM |
| RNA skabelon | 5 | - |
| DEPC H2O | Op til 25 | - |
2. Optimeret cykelprotokol
1) Standard Cykelprotokol
| Reaktionsstadie | Temperatur | Tid | Cyklus | |
| 1 | Omvendt transskription | 50°Ca | 10 min | 1 |
| 2 | Indledende denaturering | 95°C | 5 min | 1 |
| 3 | Amplifikationsreaktion | 95°C | 15 sek | 45 cyklusser |
| 60°Cb | 30 sekc |
2) Fast Cycling Protocol
|
| Reaktionsstadie | Temperatur | Tid | Cyklus |
| 1 | Omvendt transskription | 50°Ca | 2 min | 1 |
| 2 | Indledende denaturering | 95°C | 2 sek | 1 |
| 3 | Amplifikationsreaktion | 95°C | 1 sek |
45 cyklusser |
| 60°Cb | 13 sekc |
Bemærk:
a) Baglæns transskription: Temperaturen kan vælge 42°C eller 50°C i 10-15 minutter.
b) Amplifikationsreaktion: Temperaturen justeres i henhold til Tm-værdien af de designede primere.
c)Fluorescens signal erhvervelse: Indstil venligst den eksperimentelle procedure i overensstemmelse med kravene iinstrumentmanual.
Teknisk information/specifikationer
| Hot Start | Indbygget hot start |
| Detektionsmetode | Primer-probe detektion |
| PCR metode | Et trin RT-qPCR |
| Type prøve | RNA |
Noter
1. Dette produkt er kun til forskningsbrug.
2. Bær venligst det nødvendige PPE, såsom laboratoriefrakke og handsker, for at sikre din sundhed og sikkerhed!
