DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) er en endodeoxyribonuclease, der kan fordøje enkelt- eller dobbeltstrenget DNA.Den genkender og spalter phosphodiesterbindinger for at producere monodeoxynukleotider eller enkelt- eller dobbeltstrengede oligodeoxynukleotider med fosfatgrupper ved 5'-terminalen og hydroxyl ved 3'-terminalen.Aktiviteten af DNase I afhænger af Ca2+ og kan aktiveres af divalente metalioner såsom Mn2+ og Zn2+.5mM Ca2+ beskytter enzymet mod hydrolyse.I nærvær af Mg2+ kunne enzymet tilfældigt genkende og spalte et hvilket som helst sted på enhver DNA-streng.I nærvær af Mn2+ kan dobbeltstrengene af DNA samtidigt genkendes og spaltes på næsten det samme sted for at danne flade ende-DNA-fragmenter eller klæbrige ende-DNA-fragmenter med 1-2 nukleotider udstående.
Produktejendom
Bovin Pancreas DNase I blev udtrykt i gærekspressionssystem og oprenset.
Componenter
| Komponent | Bind | |||
| 0,1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNase-fri | 20 μL | 200 μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I-buffer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Transport og opbevaring
1. Opbevaringsstabilitet: – 15℃~-25℃ til opbevaring;
2.Transportstabilitet: Transport under isposer;
3. Leveres i: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50 % glycerol, pH 7,6 ved 25 ℃.
Enhedsdefinition
En enhed er defineret som mængden af enzym, der fuldstændigt vil nedbryde 1 µg pBR322 DNA på 10 minutter ved 37°C.
Kvalitetskontrol
RNase:5U DNase I med 1,6 μg MS2 RNA i 4 timer ved 37 ℃ giver ingen nedbrydning som bestemt ved agarosegelelektroforese.
Bakteriel Endotoksin:LAL-test, ifølge Chinese Pharmacopoeia IV 2020-udgave, gelgrænsetestmetode, generel regel (1143).Bakterielt endotoksinindhold bør være ≤10 EU/mg.
Brugsanvisning
1.Forbered reaktionsopløsningen i det RNase-fri rør i henhold til proportionerne nedenfor:
| Komponent | Bind |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I-buffer | 1 μL |
| DNase I, RNase-fri (5U/μL) | 1 U pr. μg RNA |
| ddH2O | Op til 10 μL |
2,37 ℃ i 15 minutter;
3.Tilsæt termineringsbufferen for at stoppe reaktionen, og opvarm ved 65 ℃ i 10 minutter for at inaktivere DNase I. Prøven kan bruges direkte til det næste transkriptionseksperiment.
Noter
1.Brug 1U DNase I pr. μg RNA, eller 1U DNase I til mindre end 1μg RNA.
2.EDTA bør tilsættes til en slutkoncentration på 5 mM for at beskytte RNA mod at blive nedbrudt under enzyminaktivering.
