CHO HCP ELISA Kit
En et-trins immunosorbent ELISA-metode anvendes i dette assay.Prøver indeholdende CHOK1 HCP reagerer samtidigt med HRP-mærket gede-anti-CHOK1-antistof og anti-CHOK1-antistof belagt på ELISA-pladen og danner til sidst et sandwichkompleks af fastfase-antistof-HCP-mærket antistof.Ubundet antigen-antistof kan fjernes ved at vaske ELISA-pladen.TMB-substratet tilsættes til brønden for tilstrækkelig reaktion.Farveudviklingen standses efter tilsætning af stopopløsningen, og OD eller absorbansværdien af reaktionsopløsningen ved 450/650 nm aflæses med en mikropladelæser.OD-værdien eller absorbansværdien er proportional med HCP-indholdet i opløsningen.Ud fra dette kan HCP-koncentrationen i opløsningen beregnes efter standardkurven.
Ansøgning
Dette kit bruges til kvantitativt at detektere indholdet af CHOK1 værtscelleproteinrester i prøver.
Componenter
| S/N | Komponent | Koncentration | Opbevaringsbetingelser |
| 1 | CHOK1 HCP Standard | 0,5 mg/ml | ≤–20℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤–20℃, beskyttes mod lys |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, beskyttes mod lys |
| 4 | 20 × PBST 0,05 % | NA | 2-8℃ |
| 5 | Stop løsning | NA | RT |
| 6 | Mikropladeforseglere | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | Høj adsorption forbelægningsplader | NA | 2-8℃ |
Udstyr påkrævet
| Forbrugsvarer / Udstyr | Fremstille | Katalog |
| Mikropladelæser | Molekylære enheder | Spectra Max M5, M5e eller tilsvarende |
| Termomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355, eller tilsvarende |
| Vortex mixer | IKA | MS3 Digital eller tilsvarende |
Opbevaring og stabilitet
1.Transport ved -25~-15°C.
2.Opbevaringsbetingelser er som vist i tabel 1;komponenter 1-2 opbevares ≤–20°C,5-6 opbevares RT,3、4、7、8 lagres ved 2-8℃;gyldighedsperioden er 12 måneder.
Produktparametre
1.Følsomhed: 1 ng/ml
2.Detektionsområde: 3-100 ng/ml
3.Præcision: Intra-assay CV≤ 10%, inter-assay CV≤ 15%
4.HCP-dækning: >80 %
5.Specificitet: Dette kit er universelt, da det specifikt reagerer med CHOK1 HCP uafhængigt af oprensningsprocessen.
Reagensforberedelse
1.PBST 0,05 %
Tag 15 ml 20×PBST 0,05%, fortyndet i ddH2O, og fyldt op til 300 ml.
2.1,0 % BSA
Tag 1 g BSA fra flasken og fortynd i 100 ml PBST 0,05%, bland godt, indtil det er helt opløst, og opbevar ved 2-8°C.Den forberedte fortyndingsbuffer er gyldig i 7 dage.Det anbefales at forberede sig efter behov.
3.Detektionsopløsning 2μg/mL
Tag 48μL 0,5 mg/ml Anti-CHO HCP-HRP og fortynd i 11.952μL 1% BSA for at opnå en slutkoncentration på 2μg/ml detektionsopløsning.
4.QC og udarbejdelse af CHOK1 HCP-standarder
| Rør Ingen. | Original | Koncentration | Bind | 1% BSA | samlet volumen | Finale |
| A | Standard | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10.000 |
| B | A | 10.000 | 50 | 450 | 500 | 1.000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tabel: Udarbejdelse af QC og standarder
Assayprocedure
1.Forbered reagenserne som angivet i "Reagensfremstilling" ovenfor.
2.Tag 50 μL standarder, prøver og QC'er (se tabel 3) i hver brønd, og tilsæt derefter 100 μL detektionsopløsning (2 μg/mL);Dæk pladen med forsegler, og anbring ELISA-pladen på termomixeren.Inkuber ved 500 rpm, 25±3 ℃ i 2 timer.
3.Vend mikropladen i vasken og kassér belægningsopløsningen.Pipetter 300 μL PBST 0,05 % i hver brønd for at vaske ELISA-pladen og kassere opløsningen, og gentag vaskningen 3 gange.Vend pladen på et rent køkkenrulle og dup tør.
4.Tilsæt 100 μL TMB-substrat (se tabel 1) til hver brønd, forsegl ELISA-pladen og inkuber i mørke ved 25±3 ℃ i 15 min.
5.Pipetter 100μL stopopløsning i hver brønd.
6.Mål absorbans ved bølgelængde på 450/650 nm med mikropladelæser.
7.Analyser data med SoftMax eller tilsvarende software.Plot standardkurven ved at bruge en fire-parametre logistisk regressionsmodel.
Eksempel på standardkurve
BEMÆRK: Hvis koncentrationen af HCP i prøven overstiger den øvre grænse for standardkurven, skal den fortyndes korrekt med fortyndingsbuffer før testning.
NOTER
Stopopløsningen er 2M svovlsyre, håndter venligst med forsigtighed for at undgå sprøjt!
