Bst 2.0 DNA-polymerase (glycerolfri)
Bst DNA-polymerase V2 er afledt af Bacillus stearothermophilus DNA-polymerase I, som har 5'→3' DNA-polymeraseaktivitet og stærk kædeerstatningsaktivitet, men ingen 5'→3'-exonukleaseaktivitet.Bst DNA Polymerase V2 er ideelt egnet til strengforskydning, isotermisk amplifikation LAMP (Loop-medieret isotermisk amplifikation) og hurtig sekventering.
Komponenter
| Komponent | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNA-polymerase V2(glycerolfri)(8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 buffer | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100 mm) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Ansøgninger
1. LAMP isotermisk amplifikation
2.DNA-streng enkelt forskydningsreaktion
3. Høj GC-gensekventering
4.DNA-sekventering af nanogramniveau.
Opbevaringstilstand
Transport under 0°C og opbevares ved -25°C~-15°C.
Enhedsdefinition
En enhed er defineret som mængden af enzym, der inkorporerer 25 nmol dNTP i syreuopløseligt materiale på 30 minutter ved 65°C.
Kvalitetskontrol
1.Protein Purity Assay (SDS-PAGE):Renheden af Bst DNA-polymerase V2 er ≥99 % bestemt ved SDS-PAGE-analyse under anvendelse af Coomassie Blue-detektion.
2.Exonuklease aktivitet:Inkubation af en 50 μL reaktion indeholdende minimum 8 U Bst DNA polymerase V2 med 1 μg λ -Hind Ⅲ fordøjet DNA i 16 timer ved 37 ℃ resulterer i ingen påviselig nedbrydning som bestemt.
3.Nickase aktivitet:Inkubation af en 50 μL reaktion indeholdende minimum 8 U Bst DNA polymerase V2 med 1 μg pBR322 DNA i 16 timer ved 37°C resulterer i ingen påviselig nedbrydning som bestemt.
4.RNase aktivitet:Inkubation af en 50 μL reaktion indeholdende minimum 8 U Bst DNA polymerase V2 med 1,6 μg MS2 RNA i 16 timer ved 37°C resulterer i ingen påviselig nedbrydning som bestemt.
5.E. coli DNA:120 U Bst DNA-polymerase V2 screenes for tilstedeværelsen af E. coli genomisk DNA ved anvendelse af TaqMan qPCR med primere, der er specifikke for E. coli 16S rRNA-locuset.E. coli genomiske DNA-kontamination er ≤1 kopi.
LAMPEREaktion
| Komponenter | 25μL |
| 10×HC Bst V2 buffer | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mm) | 1,5 μL |
| dNTP'er (10 mM hver) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Grøn (25×)a | 1,0 μL |
| Primer blandingb | 6 μL |
| Bst DNA-polymerase V2 (glycerolfri) (8 U/uL) | 1 μL |
| Skabelon | × μL |
| ddH2O | Op til 25 μL |
Bemærkninger:
1) a.SYTOTM 16 Grøn (25×): I henhold til eksperimentelle behov kan andre farvestoffer anvendes som erstatninger;
2) b.Primerblanding: opnået ved at blande 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB og andre volumener.
Reaktion og Tilstand
1 × HC Bst V2-buffer, inkubationstemperaturen er mellem 60°C og 65°C.
Varme inaktivering
80 °C, 20 min
